Электрофорез пептидов | Новостной сайт страны 24/7 Электрофорез пептидов | Новостной сайт страны 24/7 |

Сегодня: г.

Электрофорез пептидов


Разглядим сейчас способ пептидных карт. Его 1-й этап состоит в обрыве дисульфидных связей, дальше белок денатурируют и расщепляют ферментами, скажем трипсином либо пепсином. В итоге получается комплект пептидов, размер и аминокислотный состав которых характерен
для каждого отдельного белка. Смесь пептидов наносят на лист хроматографической бумаги и проводят в одном направлении хроматографию, а в другом — электрофорез. Пептиды локализуются в виде отдельных пятен, образуя характерную картину ( отпечатки пальцев ), Метод пептидных карт особенно полезен для выявления малых
После инкубации электрофореграмму высушивают и снова подвергают электрофорезу при pH 5 в перпендикулярном направлении. В парах аммиака происходит отщепление карбэтоксильных групп, гистидиновые остатки становятся доступными протонированию, и при электрофорезе пептиды, содержащие гистидин, смещаются от занимаемого другими пептидами диагонального положения в сторону катода. 

    Электрофорез пептидов. Если ионизированные аминокислоты и пептиды поместить в электрическое поле, то в зависимости от pH они движутся в сторону катода или анода. Этот метод широко используется ддя разделения пептидов, различающихся по величине суммарного заряда. Возможности метода особенно велики благодаря тому, что суммарный заряд пептида можно изменять, изменяя pH среды. 

    Пример использования хроматографии на бумаге в сочетании с электрофорезом пептидов взят из работы Ингрэма [18], посвященной изучению строения гемоглобинов. Триптические гидролизаты гемоглобина А и гемоглобина 5 сравнивали путем электрофореза на бумаге ватман № 3 ММ в системе пиридин — уксусная кислота — вода, pH 6,5, 19 в/см, в течение 150 мин, с последующей хроматографией в системе н-бутанол — уксусная кислота — вода (3 1 1) в течение 24 час. Полученные картины (фиг. 25) почти идентичны,

    Другой метод разделения пептидов — так называемый метод отпечатков пальцев . В этом методе используется лист хроматографического картона (существует картон толщиной 0,5 мм, с его помощью можно одновременно разделять до 3 мг смеси полипептидов). В углу большого пропитанного буфером листа картона (самый благоприятный буфер содержит 1,5% пиридина, 2,5% уксусной кислоты, 5% нормального бутанола, pH смеси 4,5) наносится в виде небольшой капли разделяемая смесь. Затем в течение 10—16 часов ведется электрофорез пептидов вдоль листа картона, для чего пользуются электрическим полем с напряжением 15—25 При этом первоначальное пятно разделяется на 

 
Статья прочитана 11 раз(a).
 

Еще из этой рубрики:

 

Последние Твитты

Loading

Архивы

Наши партнеры

Читать нас

Связаться с нами

Anybis16@mail.ru